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Etablierung eines mikrofluidischen 3D-Bioreaktors zur Untersuchung des transendothelialen Transports ""in vitro""

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Die vorliegende Arbeit beschreibt die erfolgreiche Entwicklung eines mikrofluidischen Bioreaktors zur Untersuchung des Blutgefaßsystems in vitro. Das zentrale Element des Bioreaktors ist ein gekrummter, poroser Mikrokanal, der das kunstliche Blutgefaß darstellt. Die zur Herstellung der Mikrokanale eingesetzte SMART Technologie ist ein Thermoformverfahren zur Bearbeitung dunner Polymerfolien, die das Thermoformen bereits modifizierter Folien ermoglicht. Als Vorstufe zur Etablierung der Kultivierung von Endothelzellen in den porosen Mikrokanalen wurde ein neues Boyden Chamber System entwickelt, welches den transendothelialen Transport durch einen porosen, gekrummten Halbkanal ermoglicht. Durch Darstellung der Krummungsradien von Blutgefaßen in diesem Halbkanal konnen so in vivo Bedingungen nachgeahmt werden. Humane Endothelzellen konnten erfolgreich zur Konfluenz kultiviert werden. Dabei zeigte sich ein Unterschied in der Morphologie zwischen Endothelzellen, die auf flachen Oberflachen kultiviert wurden, im Gegensatz zu Zellen auf gekrummten Oberflachen. Durch Schließen des porosen Halbkanals mittels thermischem Bonden, sowie Ausstattung des Mikrokanals mit Anschlussen fur ein Pumpsystem, konnte ein mikrofluidisches System entwickelt werden. Dieses erlaubt die Untersuchung des vaskularen Systems unter Scherstress Bedingungen. Der Mikrokanal wird von einer zweiten Kammer umgeben, die zur Aufnahme transportierter Substanzen, aber auch zur Kultivierung einer Ko Kultur eingesetzt werden kann. Erste Ko Kultur Experimente zeigten eine erfolgreiche Kultivierung von Fibroblasten und humanen Brustkrebszellen im angrenzenden Kompartiment. Verschiedene Reaktionen der Endothelzellen im Mikrokanal auf Scherstress Bedingungen konnten mit Hilfe des mikrofluidischen Bioreaktors nachgewiesen werden. Unter anderem wurde die Ausrichtung der Zellen in Flussrichtung sowie eine Veranderung im Aktin Zytoskelett durch die Bildung von Stress Fibers und eine erhohte Stickstoffmonoxid (NO) Produktion gezeigt. Weiterhin konnte der Bioreaktor erfolgreich zur Simulierung einer Entzundungsreaktion und damit verbundenen Rekrutierungsprozessen von Immunzellen eingesetzt werden. Konfokale Spinning Disk Mikroskopie ermoglichte eine direkte Visualisierung des ‚Rollings‘, der Adhasion und Transmigration der Monozyten. Einen weiteren Einsatz fand der Bioreaktor in der Untersuchung des transendothelialen Transports von polykationischen Peptoiden. Zur Bestatigung der Einsatzmoglichkeit dieser Peptoide in Zellkultur Experimenten wurde mit Hilfe eines Zytotoxizitatstest deren Einfluss auf die Zellaktivitat untersucht. In den eingesetzten Konzentrationen zeigten die Peptoide keine oder nur geringe Zytotoxizitat. Mit Hilfe konfokaler Fluoreszenzmikroskopie konnte die erfolgreiche Aufnahme der Peptoide in Endothelzellen nachgewiesen werden. Mechanistische Untersuchungen ergaben eine Beteiligung endozytotischer Wege bei der Aufnahme der Peptoide. Die quantitative Untersuchung der Peptoid Aufnahme in Endothelzellen ergab eine erhohte Aufnahme guanidinylierter Peptoide im Vergleich zu deren Amin Analoga, sowohl bei Peptoiden mit aliphatischen als auch aromatischen Seitenketten. Der neu entwickelt mikrofluidische Bioreaktor mit dem gekrummten kunstlichen Blutgefaß bietet somit eine Plattform fur zahlreiche Untersuchungen, sowohl des Endothels in seiner naturlichen, gekrummten Form unter fluidischen Bedingungen, als auch verschiedener transendothelialer Transportprozesse. Durch Variation der Kanalgeometrien oder der Poren kann der Bioreaktor optimal an die entsprechenden Voraussetzungen der Experimente angepasst werden.


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Product Details
  • ISBN-13: 9783954042005
  • Binding: Paperback
  • Language: German
  • Width: 259 mm
  • ISBN-10: 3954042002
  • Height: 210 mm
  • Weight: 10 gr

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